nature.com भ्रमण गर्नुभएकोमा धन्यवाद। तपाईंले प्रयोग गरिरहनुभएको ब्राउजर संस्करणमा सीमित CSS समर्थन छ। उत्तम अनुभवको लागि, हामी तपाईंलाई नवीनतम ब्राउजर संस्करण प्रयोग गर्न सिफारिस गर्छौं (वा इन्टरनेट एक्सप्लोररमा अनुकूलता मोड बन्द गर्नुहोस्)। थप रूपमा, निरन्तर समर्थन सुनिश्चित गर्न, यो साइटमा शैलीहरू वा जाभास्क्रिप्ट समावेश हुनेछैन।
सिन्थन ३-(एन्थ्रेसेन-९-यल)-२-स्यानोएक्रिलोयल क्लोराइड ४ लाई संश्लेषित गरिएको थियो र विभिन्न नाइट्रोजन न्यूक्लियोफाइलहरूसँगको प्रतिक्रिया मार्फत विभिन्न प्रकारका अत्यधिक सक्रिय हेटेरोसाइक्लिक यौगिकहरूलाई संश्लेषण गर्न प्रयोग गरिएको थियो। प्रत्येक संश्लेषित हेटेरोसाइक्लिक यौगिकको संरचनालाई स्पेक्ट्रोस्कोपिक र एलिमेन्टल विश्लेषण प्रयोग गरेर पूर्ण रूपमा चित्रण गरिएको थियो। तेह्र उपन्यास हेटेरोसाइक्लिक यौगिकहरू मध्ये दसले बहुऔषधि-प्रतिरोधी ब्याक्टेरिया (MRSA) विरुद्ध उत्साहजनक प्रभावकारिता देखाए। ती मध्ये, यौगिकहरू ६, ७, १०, १३b, र १४ ले ४ सेन्टिमिटरको नजिक निषेध क्षेत्रहरूको साथ उच्चतम जीवाणुरोधी गतिविधि देखाए। यद्यपि, आणविक डकिङ अध्ययनहरूले पत्ता लगाए कि यौगिकहरूमा पेनिसिलिन-बाइन्डिङ प्रोटीन २a (PBP2a) सँग फरक बाध्यकारी सम्बन्ध थियो, जुन MRSA प्रतिरोधको लागि एक प्रमुख लक्ष्य थियो। ७, १० र १४ जस्ता केही यौगिकहरूले सह-क्रिस्टलाइज्ड क्विनाजोलिनोन लिगान्डको तुलनामा PBP2a को सक्रिय साइटमा उच्च बाध्यकारी सम्बन्ध र अन्तरक्रिया स्थिरता देखाए। यसको विपरित, यौगिकहरू ६ र १३b मा डकिङ स्कोर कम थियो तर अझै पनि महत्त्वपूर्ण जीवाणुरोधी गतिविधि प्रदर्शन गरियो, यौगिक ६ मा सबैभन्दा कम MIC (९.७ μg/१०० μL) र MBC (७८.१२५ μg/१०० μL) मानहरू थिए। डकिङ विश्लेषणले हाइड्रोजन बन्धन र π-स्ट्याकिङ सहित प्रमुख अन्तरक्रियाहरू प्रकट गर्‍यो, विशेष गरी Lys २७३, Lys ३१६ र Arg २९८ जस्ता अवशेषहरूसँग, जुन PBP2a को क्रिस्टल संरचनामा सह-क्रिस्टलाइज्ड लिगान्डसँग अन्तरक्रिया गर्ने रूपमा पहिचान गरिएको थियो। यी अवशेषहरू PBP2a को इन्जाइम्याटिक गतिविधिको लागि आवश्यक छन्। यी नतिजाहरूले सुझाव दिन्छन् कि संश्लेषित यौगिकहरूले आशाजनक एन्टी-MRSA औषधिहरूको रूपमा काम गर्न सक्छन्, प्रभावकारी चिकित्सीय उम्मेदवारहरू पहिचान गर्न बायोसेसँग आणविक डकिङ संयोजनको महत्त्वलाई हाइलाइट गर्दै।
यस शताब्दीको सुरुवाती केही वर्षहरूमा, अनुसन्धान प्रयासहरू मुख्यतया सजिलै उपलब्ध सुरुवाती सामग्रीहरू प्रयोग गरेर एन्टिमाइक्रोबियल गतिविधि भएका धेरै नवीन हेटेरोसाइक्लिक प्रणालीहरूको संश्लेषणको लागि नयाँ, सरल प्रक्रियाहरू र विधिहरू विकास गर्नमा केन्द्रित थिए।
धेरै उल्लेखनीय हेटेरोसाइक्लिक प्रणालीहरूको संश्लेषणको लागि एक्रिलोनिट्राइल मोइटीहरूलाई महत्त्वपूर्ण सुरुवाती सामग्री मानिन्छ किनभने तिनीहरू अत्यधिक प्रतिक्रियाशील यौगिकहरू हुन्। यसबाहेक, हालका वर्षहरूमा २-साइनोएक्रिलोइल क्लोराइड डेरिभेटिभहरू औषधीय अनुप्रयोगहरूको क्षेत्रमा महत्त्वपूर्ण महत्त्वका उत्पादनहरूको विकास र संश्लेषणको लागि व्यापक रूपमा प्रयोग गरिएको छ, जस्तै औषधि मध्यवर्तीहरू१,२,३, एन्टी-एचआईभी, एन्टीभाइरल, एन्टीक्यान्सर, एन्टीब्याक्टेरियल, एन्टीडिप्रेसन्ट र एन्टीअक्सिडेन्ट एजेन्टहरू४,५,६,७,८,९,१० को अग्रदूतहरू। हालै, एन्थ्रेसिन र यसको डेरिभेटिभहरूको जैविक प्रभावकारिता, जसमा तिनीहरूको एन्टिबायोटिक, एन्टीक्यान्सर११,१२, एन्टिब्याक्टेरियल१३,१४,१५ र कीटनाशक गुणहरू१६,१७ समावेश छन्, ले धेरै ध्यान आकर्षित गरेको छ१८,१९,२०,२१। एक्रिलोनिट्राइल र एन्थ्रेसिन मोइटीहरू युक्त एन्टिमाइक्रोबियल यौगिकहरू चित्र १ र २ मा देखाइएको छ।
विश्व स्वास्थ्य संगठन (WHO) (२०२१) का अनुसार, एन्टिमाइक्रोबियल प्रतिरोध (AMR) स्वास्थ्य र विकासको लागि विश्वव्यापी खतरा हो। २२,२३,२४,२५। बिरामीहरूलाई निको पार्न सकिँदैन, जसले गर्दा अस्पतालमा लामो समयसम्म बस्नुपर्छ र महँगो औषधिको आवश्यकता पर्छ, साथै मृत्युदर र अशक्तता बढ्छ। प्रभावकारी एन्टिमाइक्रोबियलको अभावले प्रायः विभिन्न संक्रमणहरूको उपचार असफल हुन्छ, विशेष गरी केमोथेरापी र प्रमुख शल्यक्रियाहरूको समयमा।
विश्व स्वास्थ्य संगठन २०२४ को प्रतिवेदन अनुसार, मेथिसिलिन-प्रतिरोधी स्टेफिलोकोकस ऑरियस (MRSA) र ई. कोलाई प्राथमिकता रोगजनकहरूको सूचीमा समावेश छन्। दुवै ब्याक्टेरिया धेरै एन्टिबायोटिकहरूको प्रतिरोधी हुन्छन्, त्यसैले तिनीहरू उपचार र नियन्त्रण गर्न गाह्रो हुने संक्रमणहरूको प्रतिनिधित्व गर्छन्, र यो समस्यालाई सम्बोधन गर्न नयाँ र प्रभावकारी एन्टिमाइक्रोबियल यौगिकहरू विकास गर्न तत्काल आवश्यकता छ। एन्थ्रेसिन र यसका डेरिभेटिभहरू प्रख्यात एन्टिमाइक्रोबियलहरू हुन् जसले ग्राम-पोजिटिभ र ग्राम-नेगेटिभ ब्याक्टेरिया दुवैमा कार्य गर्न सक्छन्। यस अध्ययनको उद्देश्य स्वास्थ्यको लागि खतरनाक यी रोगजनकहरूसँग लड्न सक्ने नयाँ डेरिभेटिभ संश्लेषण गर्नु हो।
विश्व स्वास्थ्य संगठन (WHO) ले रिपोर्ट गरेको छ कि धेरै ब्याक्टेरिया रोगजनकहरू धेरै एन्टिबायोटिकहरू प्रतिरोधी हुन्छन्, जसमा मेथिसिलिन-प्रतिरोधी स्टेफिलोकोकस ऑरियस (MRSA) समावेश छ, जुन समुदाय र स्वास्थ्य सेवा सेटिङहरूमा संक्रमणको एक सामान्य कारण हो। MRSA संक्रमण भएका बिरामीहरूमा औषधि-संवेदनशील संक्रमण भएका बिरामीहरूको तुलनामा मृत्युदर ६४% बढी भएको रिपोर्ट गरिएको छ। थप रूपमा, E. coli ले विश्वव्यापी जोखिम निम्त्याउँछ किनभने कार्बापेनेम-प्रतिरोधी Enterobacteriaceae (अर्थात्, E. coli) विरुद्धको अन्तिम रक्षा रेखा कोलिस्टिन हो, तर कोलिस्टिन-प्रतिरोधी ब्याक्टेरिया हालै धेरै देशहरूमा रिपोर्ट गरिएको छ। २२,२३,२४,२५
त्यसकारण, विश्व स्वास्थ्य संगठनको एन्टिमाइक्रोबियल प्रतिरोध सम्बन्धी विश्वव्यापी कार्य योजना २६ अनुसार, नयाँ एन्टिमाइक्रोबियलहरूको खोज र संश्लेषणको तत्काल आवश्यकता छ। एन्थ्रेसिन र एक्रिलोनिट्राइलको एन्टिब्याक्टेरियल २७, एन्टिफंगल २८, क्यान्सर प्रतिरोधी २९ र एन्टिअक्सिडेन्ट ३० एजेन्टको रूपमा ठूलो सम्भावनालाई धेरै प्रकाशित पत्रहरूमा हाइलाइट गरिएको छ। यस सन्दर्भमा, यो भन्न सकिन्छ कि यी डेरिभेटिभहरू मेथिसिलिन-प्रतिरोधी स्टेफिलोकोकस ऑरियस (MRSA) विरुद्ध प्रयोगको लागि राम्रो उम्मेदवार हुन्।
अघिल्ला साहित्य समीक्षाले हामीलाई यी वर्गहरूमा नयाँ डेरिभेटिभहरू संश्लेषण गर्न प्रेरित गर्‍यो। त्यसकारण, वर्तमान अध्ययनले एन्थ्रेसिन र एक्रिलोनिट्राइल मोइटीहरू भएको नयाँ हेटेरोसाइक्लिक प्रणालीहरू विकास गर्ने, तिनीहरूको एन्टिमाइक्रोबियल र एन्टिब्याक्टेरियल प्रभावकारिताको मूल्याङ्कन गर्ने र आणविक डकिङद्वारा पेनिसिलिन-बाइन्डिङ प्रोटीन 2a (PBP2a) सँग तिनीहरूको सम्भावित बाध्यकारी अन्तरक्रियाको अनुसन्धान गर्ने उद्देश्य राखेको थियो। अघिल्ला अध्ययनहरूमा निर्माण गर्दै, वर्तमान अध्ययनले शक्तिशाली PBP2a निरोधात्मक गतिविधि भएका आशाजनक एन्टिमेथिसिलिन-प्रतिरोधी स्टेफिलोकोकस ऑरियस (MRSA) एजेन्टहरू पहिचान गर्न हेटेरोसाइक्लिक प्रणालीहरूको संश्लेषण, जैविक मूल्याङ्कन र कम्प्युटेसनल विश्लेषणलाई जारी राख्यो31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42,43,44,45,46,47,48,49।
हाम्रो हालको अनुसन्धान एन्थ्रेसिन र एक्रिलोनिट्राइल मोइटीज भएको नयाँ हेटेरोसाइक्लिक यौगिकहरूको संश्लेषण र एन्टिमाइक्रोबियल मूल्याङ्कनमा केन्द्रित छ। 3-(एन्थ्रेसिन-9-yl)-2-सायनोएस्रिलोइल क्लोराइड 4 तयार पारिएको थियो र नयाँ हेटेरोसाइक्लिक प्रणालीहरूको निर्माणको लागि निर्माण ब्लकको रूपमा प्रयोग गरिएको थियो।
यौगिक ४ को संरचना वर्णक्रमीय डेटा प्रयोग गरेर निर्धारण गरिएको थियो। १H-NMR स्पेक्ट्रमले ९.२६ ppm मा CH= को उपस्थिति देखायो, IR स्पेक्ट्रमले १७३७ cm−१ मा कार्बोनिल समूह र २२२४ cm−१ मा साइनो समूहको उपस्थिति देखायो, र १३CNMR स्पेक्ट्रमले पनि प्रस्तावित संरचनालाई पुष्टि गर्‍यो (प्रयोगात्मक खण्ड हेर्नुहोस्)।
३-(एन्थ्रासेन-९-यल)-२-साइनोएक्रिलोयल क्लोराइड ४ को संश्लेषण एरोमेटिक समूह २५०, ४१, ४२, ५३ को हाइड्रोलिसिसद्वारा इथेनोलिक सोडियम हाइड्रोक्साइड घोल (१०%) प्रयोग गरेर एसिड ३५४, ४५, ५६ प्रदान गरिएको थियो, जसलाई त्यसपछि पानीको नुहाउने ठाउँमा थायोनिल क्लोराइडले उपचार गरी उच्च उपज (८८.५%) मा एक्रिलोयल क्लोराइड डेरिभेटिभ ४ प्रदान गरिएको थियो, जुन चित्र ३ मा देखाइएको छ।
अपेक्षित जीवाणुरोधी प्रभावकारिताका साथ नयाँ हेटेरोसाइक्लिक यौगिकहरू सिर्जना गर्न, विभिन्न डाइन्यूक्लियोफाइलहरूसँग एसाइल क्लोराइड ४ को प्रतिक्रिया गरिएको थियो।
एसिड क्लोराइड ४ लाई ०° मा हाइड्राजिन हाइड्रेटले एक घण्टाको लागि उपचार गरिएको थियो। दुर्भाग्यवश, पाइराजोलोन ५ प्राप्त भएन। उत्पादन एक एक्रिलामाइड व्युत्पन्न थियो जसको संरचना स्पेक्ट्रल डेटा द्वारा पुष्टि गरिएको थियो। यसको IR स्पेक्ट्रमले १७२० cm−१ मा C=O, २२२८ cm−१ मा C≡N र ३४२४ cm−१ मा NH को अवशोषण ब्यान्डहरू देखायो। १H-NMR स्पेक्ट्रमले ९.३ ppm मा ओलेफिन प्रोटोन र NH प्रोटोनहरूको एक्सचेन्ज सिंगलेट संकेत देखायो (प्रयोगात्मक खण्ड हेर्नुहोस्)।
राम्रो उत्पादन (७७%) मा N-phenylacryloylhydrazine डेरिभेटिभ ७ लाई प्रदान गर्न एसिड क्लोराइड ४ को दुई मोलहरूलाई फेनिलहाइड्राजिनको एक मोलसँग प्रतिक्रिया गरिएको थियो (चित्र ५)। ७ को संरचना इन्फ्रारेड स्पेक्ट्रोस्कोपी डेटा द्वारा पुष्टि गरिएको थियो, जसले १६९१ र १६७१ cm−१ मा दुई C=O समूहहरूको अवशोषण, २२२२ cm−१ मा CN समूहको अवशोषण र ३२४५ cm−१ मा NH समूहको अवशोषण देखाएको थियो, र यसको १H-NMR स्पेक्ट्रमले CH समूहलाई ९.१५ र ८.८१ ppm र NH प्रोटोनलाई १०.८८ ppm मा देखाएको थियो (प्रयोगात्मक खण्ड हेर्नुहोस्)।
यस अध्ययनमा, १,३-डाइनुक्लियोफाइलहरूसँग एसिल क्लोराइड ४ को प्रतिक्रियाको अनुसन्धान गरिएको थियो। कोठाको तापक्रममा TEA लाई आधारको रूपमा १,४-डाइअक्सेनमा २-एमिनोपायरिडिनसँग एसिल क्लोराइड ४ को उपचारले एक्रिलामाइड डेरिभेटिभ ८ प्रदान गर्‍यो (चित्र ५), जसको संरचना स्पेक्ट्रल डेटा प्रयोग गरेर पहिचान गरिएको थियो। IR स्पेक्ट्राले २२२२ सेमी−१ मा साइनो स्ट्रेचिङ, ३१४८ सेमी−१ मा NH, र १६६५ सेमी−१ मा कार्बोनिलको अवशोषण ब्यान्डहरू देखायो; १H NMR स्पेक्ट्राले ९.१४ पीपीएममा ओलेफिन प्रोटोनको उपस्थिति पुष्टि गर्‍यो (प्रयोगात्मक खण्ड हेर्नुहोस्)।
यौगिक ४ ले थायोरियासँग प्रतिक्रिया गरेर पाइरिमिडिनेथियोन ९ दिन्छ; यौगिक ४ ले थायोसेमिकार्बजाइडसँग प्रतिक्रिया गरेर थायोपाइराजोल डेरिभेटिभ १० दिन्छ (चित्र ५)। यौगिक ९ र १० को संरचनाहरू वर्णक्रमीय र तत्व विश्लेषणद्वारा पुष्टि गरिएको थियो (प्रयोगात्मक खण्ड हेर्नुहोस्)।
टेट्राजाइन-३-थियोल ११ लाई १,४-डाइनुक्लियोफाइल (चित्र ५) को रूपमा थायोकार्बजाइडसँग यौगिक ४ को प्रतिक्रियाद्वारा तयार गरिएको थियो, र यसको संरचना स्पेक्ट्रोस्कोपी र एलिमेन्टल विश्लेषणद्वारा पुष्टि गरिएको थियो। इन्फ्रारेड स्पेक्ट्रममा, C=N बन्ड १६१९ सेमी−१ मा देखा पर्‍यो। एकै समयमा, यसको १H-NMR स्पेक्ट्रमले ७.७८–८.६६ पीपीएममा एरोमेटिक प्रोटोन र ३.३१ पीपीएममा एसएच प्रोटोनको बहुप्लेट संकेतहरू राख्यो (प्रयोगात्मक खण्ड हेर्नुहोस्)।
एक्रिलोयल क्लोराइड ४ ले १,२-डायमिनोबेन्जिन, २-एमिनोथियोफेनोल, एन्थ्रानिलिक एसिड, १,२-डायमिनोइथेन र इथेनोलामाइनसँग १,४-डाइनुक्लियोफाइलको रूपमा प्रतिक्रिया गरेर नयाँ हेटेरोसाइक्लिक प्रणालीहरू बनाउँछ (१३-१६)।
यी नयाँ संश्लेषित यौगिकहरूको संरचनाहरू वर्णक्रमीय र तत्व विश्लेषणद्वारा पुष्टि गरिएको थियो (प्रयोगात्मक खण्ड हेर्नुहोस्)। २-हाइड्रोक्सिफेनिलाएक्रिलामाइड डेरिभेटिभ १७ २-एमिनोफेनोलसँग डाइन्यूक्लियोफाइलको रूपमा प्रतिक्रियाद्वारा प्राप्त गरिएको थियो (चित्र ६), र यसको संरचना वर्णक्रमीय र तत्व विश्लेषणद्वारा पुष्टि गरिएको थियो। यौगिक १७ को इन्फ्रारेड स्पेक्ट्रमले देखायो कि C=O र C≡N संकेतहरू क्रमशः १६८१ र २२२६ cm−१ मा देखा परेका थिए। यसैबीच, यसको १H-NMR स्पेक्ट्रमले ९.१९ ppm मा ओलेफिन प्रोटोनको सिंगलेट संकेत कायम राख्यो, र OH प्रोटोन ९.८२ ppm मा देखा पर्यो (प्रयोगात्मक खण्ड हेर्नुहोस्)।
कोठाको तापक्रममा विलायकको रूपमा डाइअक्सेन र उत्प्रेरकको रूपमा TEA मा एक न्यूक्लियोफाइल (जस्तै, इथाइलामाइन, ४-टोलुइडिन, र ४-मेथोक्सियानिलिन) सँग एसिड क्लोराइड ४ को प्रतिक्रियाले हरियो क्रिस्टलीय एक्रिलामाइड डेरिभेटिभहरू १८, १९a, र १९b प्रदान गर्‍यो। यौगिकहरू १८, १९a, र १९b को मौलिक र वर्णक्रमीय डेटाले यी डेरिभेटिभहरूको संरचनाहरू पुष्टि गर्‍यो (प्रयोगात्मक खण्ड हेर्नुहोस्) (चित्र ७)।
विभिन्न सिंथेटिक यौगिकहरूको एन्टिमाइक्रोबियल गतिविधिको जाँच गरेपछि, तालिका १ र चित्र ८ मा देखाइए अनुसार फरक परिणामहरू प्राप्त भए (चित्र फाइल हेर्नुहोस्)। सबै परीक्षण गरिएका यौगिकहरूले ग्राम-सकारात्मक ब्याक्टेरिया MRSA विरुद्ध विभिन्न डिग्रीको अवरोध देखाए, जबकि ग्राम-नकारात्मक ब्याक्टेरिया Escherichia coli ले सबै यौगिकहरूको पूर्ण प्रतिरोध देखाए। परीक्षण गरिएका यौगिकहरूलाई MRSA विरुद्ध अवरोध क्षेत्रको व्यासको आधारमा तीन वर्गमा विभाजन गर्न सकिन्छ। पहिलो वर्ग सबैभन्दा सक्रिय थियो र पाँच यौगिकहरू (६, ७, १०, १३b र १४) मिलेर बनेको थियो। यी यौगिकहरूको अवरोध क्षेत्रको व्यास ४ सेमीको नजिक थियो; यस वर्गमा सबैभन्दा सक्रिय यौगिकहरू यौगिकहरू ६ र १३b थिए। दोस्रो वर्ग मध्यम रूपमा सक्रिय थियो र अन्य पाँच यौगिकहरू (११, १३a, १५, १८ र १९a) मिलेर बनेको थियो। यी यौगिकहरूको अवरोध क्षेत्र ३.३ देखि ३.६५ सेमी सम्म थियो, जसमा यौगिक ११ ले ३.६५ ± ०.१ सेमीको सबैभन्दा ठूलो अवरोध क्षेत्र देखाएको थियो। अर्कोतर्फ, अन्तिम समूहमा सबैभन्दा कम एन्टिमाइक्रोबियल गतिविधि (३ सेन्टिमिटर भन्दा कम) भएका तीन यौगिकहरू (८, १७ र १९ख) थिए। चित्र ९ ले विभिन्न निषेध क्षेत्रहरूको वितरण देखाउँछ।
परीक्षण गरिएका यौगिकहरूको एन्टिमाइक्रोबियल गतिविधिको थप अनुसन्धानमा प्रत्येक यौगिकको लागि MIC र MBC को निर्धारण समावेश थियो। परिणामहरू थोरै फरक थिए (तालिका २, ३ र चित्र १० मा देखाइए अनुसार (चित्र फाइल हेर्नुहोस्)), यौगिकहरू ७, ११, १३a र १५ लाई स्पष्ट रूपमा उत्कृष्ट यौगिकहरूको रूपमा पुन: वर्गीकृत गरिएको थियो। तिनीहरूको MIC र MBC मानहरू समान थिए (३९.०६ μg/१०० μL)। यद्यपि यौगिकहरू ७ र ८ मा MIC मानहरू कम थिए (९.७ μg/१०० μL), तिनीहरूको MBC मानहरू उच्च थिए (७८.१२५ μg/१०० μL)। त्यसकारण, तिनीहरूलाई पहिले उल्लेख गरिएका यौगिकहरू भन्दा कमजोर मानिन्थ्यो। यद्यपि, यी छ यौगिकहरू परीक्षण गरिएकाहरूमध्ये सबैभन्दा प्रभावकारी थिए, किनकि तिनीहरूको MBC मानहरू १०० μg/१०० μL भन्दा कम थिए।
यौगिकहरू (१०, १४, १८ र १९b) अन्य परीक्षण गरिएका यौगिकहरूको तुलनामा कम सक्रिय थिए किनभने तिनीहरूको MBC मानहरू १५६ देखि ३१२ μg/१०० μL सम्म थिए। अर्कोतर्फ, यौगिकहरू (८, १७ र १९a) सबैभन्दा कम आशाजनक थिए किनभने तिनीहरूको MBC मानहरू उच्चतम थिए (क्रमशः ६२५, ६२५ र १२५० μg/१०० μL)।
अन्तमा, तालिका ३ मा देखाइएको सहिष्णुता स्तर अनुसार, परीक्षण गरिएका यौगिकहरूलाई तिनीहरूको कार्य विधिको आधारमा दुई वर्गमा विभाजन गर्न सकिन्छ: जीवाणुनाशक प्रभाव भएका यौगिकहरू (७, ८, १०, ११, १३क, १५, १८, १९ख) र जीवाणुरोधी प्रभाव भएका यौगिकहरू (६, १३ख, १४, १७, १९क)। ती मध्ये, यौगिकहरू ७, ११, १३क र १५ लाई प्राथमिकता दिइन्छ, जसले धेरै कम सांद्रता (३९.०६ μg/१०० μL) मा मार्ने गतिविधि प्रदर्शन गर्दछ।
परीक्षण गरिएका तेह्र यौगिकहरूमध्ये दशले एन्टिबायोटिक-प्रतिरोधी मेथिसिलिन-प्रतिरोधी स्टेफिलोकोकस ऑरियस (MRSA) विरुद्ध क्षमता देखाए। त्यसकारण, थप एन्टिबायोटिक-प्रतिरोधी रोगजनकहरू (विशेष गरी रोगजनक ग्राम-पोजिटिभ र ग्राम-नेगेटिभ ब्याक्टेरियालाई ढाक्ने स्थानीय आइसोलेटहरू) र रोगजनक यीस्टहरूसँग थप स्क्रिनिङ सिफारिस गरिन्छ, साथै प्रत्येक यौगिकको सुरक्षा मूल्याङ्कन गर्न साइटोटोक्सिक परीक्षण पनि सिफारिस गरिन्छ।
मेथिसिलिन-प्रतिरोधी स्टेफिलोकोकस ऑरियस (MRSA) मा पेनिसिलिन-बाइन्डिङ प्रोटीन 2a (PBP2a) को अवरोधकको रूपमा संश्लेषित यौगिकहरूको क्षमताको मूल्याङ्कन गर्न आणविक डकिङ अध्ययनहरू सञ्चालन गरिएको थियो। PBP2a ब्याक्टेरिया कोशिका भित्ता जैवसंश्लेषणमा संलग्न एक प्रमुख इन्जाइम हो, र यस इन्जाइमको अवरोधले कोशिका भित्ता गठनमा हस्तक्षेप गर्दछ, अन्ततः ब्याक्टेरियाको लिसिस र कोशिका मृत्यु1 निम्त्याउँछ। डकिङ परिणामहरू तालिका 4 मा सूचीबद्ध छन् र पूरक डेटा फाइलमा थप विवरणमा वर्णन गरिएको छ, र परिणामहरूले देखाउँछन् कि धेरै यौगिकहरूले PBP2a को लागि बलियो बाइन्डिङ आत्मीयता प्रदर्शन गरे, विशेष गरी Lys 273, Lys 316, र Arg 298 जस्ता प्रमुख सक्रिय साइट अवशेषहरू। हाइड्रोजन बन्धन र π-स्ट्याकिङ सहितको अन्तरक्रियाहरू सह-क्रिस्टलाइज्ड क्विनाजोलिनोन लिगान्ड (CCL) सँग धेरै मिल्दोजुल्दो थिए, जसले यी यौगिकहरूको शक्तिशाली अवरोधकको रूपमा सम्भावनालाई संकेत गर्दछ।
आणविक डकिङ डेटा, अन्य कम्प्युटेसनल प्यारामिटरहरूसँगै, यी यौगिकहरूको अवलोकन गरिएको जीवाणुरोधी गतिविधिको लागि जिम्मेवार प्रमुख संयन्त्र PBP2a निषेध थियो भनेर दृढतापूर्वक सुझाव दियो। डकिङ स्कोर र रूट मीन स्क्वायर डेभिएसन (RMSD) मानहरूले यस परिकल्पनालाई समर्थन गर्दै बाइन्डिङ आत्मीयता र स्थिरतालाई थप प्रकट गर्‍यो। तालिका ४ मा देखाइएझैं, धेरै यौगिकहरूले राम्रो बाइन्डिङ आत्मीयता देखाए पनि, केही यौगिकहरू (जस्तै, ७, ९, १०, र १४) मा सह-क्रिस्टलाइज्ड लिगान्ड भन्दा उच्च डकिङ स्कोरहरू थिए, जसले संकेत गर्दछ कि तिनीहरूको PBP2a को सक्रिय साइट अवशेषहरूसँग बलियो अन्तरक्रिया हुन सक्छ। यद्यपि, सबैभन्दा जैविक सक्रिय यौगिकहरू ६ र १३b ले अन्य लिगान्डहरूको तुलनामा थोरै कम डकिङ स्कोरहरू (क्रमशः -५.९८ र -५.६३) देखाए। यसले सुझाव दिन्छ कि डकिङ स्कोरहरू बाइन्डिङ आत्मीयताको भविष्यवाणी गर्न प्रयोग गर्न सकिन्छ, अन्य कारकहरू (जस्तै, लिगान्ड स्थिरता र जैविक वातावरणमा आणविक अन्तरक्रियाहरू) ले पनि जीवाणुरोधी गतिविधि निर्धारण गर्न प्रमुख भूमिका खेल्छन्। उल्लेखनीय रूपमा, सबै संश्लेषित यौगिकहरूको RMSD मानहरू 2 Å भन्दा कम थिए, जसले पुष्टि गर्दछ कि तिनीहरूको डकिङ पोजहरू संरचनात्मक रूपमा सह-क्रिस्टलाइज्ड लिगान्डको बाध्यकारी रूपान्तरणसँग मिल्दोजुल्दो छन्, जसले शक्तिशाली PBP2a अवरोधकहरूको रूपमा तिनीहरूको क्षमतालाई थप समर्थन गर्दछ।
यद्यपि डकिङ स्कोर र RMS मानहरूले मूल्यवान भविष्यवाणीहरू प्रदान गर्दछ, यी डकिङ परिणामहरू र एन्टिमाइक्रोबियल गतिविधि बीचको सम्बन्ध पहिलो नजरमा सधैं स्पष्ट हुँदैन। यद्यपि PBP2a निषेधलाई एन्टिमाइक्रोबियल गतिविधिलाई प्रभाव पार्ने प्रमुख कारकको रूपमा दृढतापूर्वक समर्थन गरिएको छ, धेरै भिन्नताहरूले सुझाव दिन्छ कि अन्य जैविक गुणहरूले पनि महत्त्वपूर्ण भूमिका खेल्छन्। यौगिकहरू 6 र 13b ले उच्चतम एन्टिमाइक्रोबियल गतिविधि देखाए, दुवैको अवरोध क्षेत्र व्यास 4 सेमी र सबैभन्दा कम MIC (9.7 μg/100 μL) र MBC (78.125 μg/100 μL) मानहरू, यौगिकहरू 7, 9, 10 र 14 को तुलनामा तिनीहरूको कम डकिङ स्कोर भए तापनि। यसले सुझाव दिन्छ कि PBP2a निषेधले एन्टिमाइक्रोबियल गतिविधिमा योगदान पुर्‍याउँछ, ब्याक्टेरिया वातावरणमा घुलनशीलता, जैवउपलब्धता र अन्तरक्रिया गतिशीलता जस्ता कारकहरूले पनि समग्र गतिविधिलाई प्रभाव पार्छन्। चित्र 11 ले तिनीहरूको डकिङ पोज देखाउँछ, जसले संकेत गर्दछ कि दुवै यौगिकहरू, अपेक्षाकृत कम बाइन्डिङ स्कोरहरूको साथ पनि, अझै पनि PBP2a को प्रमुख अवशेषहरूसँग अन्तरक्रिया गर्न सक्षम छन्, सम्भावित रूपमा निषेध जटिललाई स्थिर बनाउँछ। यसले प्रकाश पार्छ कि आणविक डकिङले PBP2a निषेधमा महत्त्वपूर्ण अन्तर्दृष्टि प्रदान गर्दछ, यी यौगिकहरूको वास्तविक-विश्व एन्टिमाइक्रोबियल प्रभावहरू पूर्ण रूपमा बुझ्न अन्य जैविक कारकहरूलाई पनि विचार गर्नुपर्छ।
PBP2a (PDB ID: 4CJN) को क्रिस्टल संरचना प्रयोग गरेर, मेथिसिलिन-प्रतिरोधी स्टेफिलोकोकस ऑरियस (MRSA) को पेनिसिलिन-बाइन्डिङ प्रोटीन 2a (PBP2a) सँग डक गरिएका सबैभन्दा सक्रिय यौगिकहरू 6 र 13b को 2D र 3D अन्तरक्रिया नक्साहरू निर्माण गरियो। यी नक्साहरूले यी यौगिकहरूको अन्तरक्रिया ढाँचाहरूलाई पुन: डक गरिएको सह-क्रिस्टलाइज्ड क्विनाजोलिनोन लिगान्ड (CCL) सँग तुलना गर्छन्, हाइड्रोजन बन्धन, π-स्ट्याकिंग, र आयनिक अन्तरक्रियाहरू जस्ता प्रमुख अन्तरक्रियाहरूलाई हाइलाइट गर्दै।
कम्पाउन्ड ७ को लागि पनि यस्तै ढाँचा अवलोकन गरिएको थियो, जसले कम्पाउन्ड १० को तुलनामा तुलनात्मक रूपमा उच्च डकिङ स्कोर (-६.३२) र समान निषेध क्षेत्र व्यास (३.९ सेमी) देखाएको थियो। यद्यपि, यसको MIC (३९.०८ μg/१०० μL) र MBC (३९.०६ μg/१०० μL) उल्लेखनीय रूपमा उच्च थिए, जसले जीवाणुरोधी प्रभाव प्रदर्शन गर्न उच्च सांद्रता आवश्यक पर्ने संकेत गर्दछ। यसले सुझाव दिन्छ कि कम्पाउन्ड ७ ले डकिङ अध्ययनहरूमा बलियो बाध्यकारी आत्मीयता देखाए पनि, जैव उपलब्धता, सेलुलर अपटेक, वा अन्य भौतिक-रासायनिक गुणहरू जस्ता कारकहरूले यसको जैविक प्रभावकारितालाई सीमित गर्न सक्छन्। यद्यपि कम्पाउन्ड ७ ले ब्याक्टेरियानाशक गुणहरू देखाए, यो यौगिक ६ र १३b को तुलनामा ब्याक्टेरियाको वृद्धिलाई रोक्न कम प्रभावकारी थियो।
कम्पाउन्ड १० ले उच्चतम डकिङ स्कोर (-६.४०) सँग नाटकीय भिन्नता देखायो, जसले PBP2a सँग बलियो बाइन्डिङ आत्मीयतालाई संकेत गर्दछ। यद्यपि, यसको निषेध व्यास क्षेत्र (३.९ सेमी) कम्पाउन्ड ७ सँग तुलनात्मक थियो, र यसको MBC (३१२ μg/१०० μL) कम्पाउन्ड ६, ७ र १३b भन्दा उल्लेखनीय रूपमा उच्च थियो, जसले कमजोर जीवाणुनाशक गतिविधिलाई संकेत गर्दछ। यसले सुझाव दिन्छ कि राम्रो डकिङ भविष्यवाणीहरूको बावजुद, घुलनशीलता, स्थिरता, वा ब्याक्टेरिया झिल्लीको कमजोर पारगम्यता जस्ता अन्य सीमित कारकहरूको कारणले गर्दा कम्पाउन्ड १० MRSA मार्न कम प्रभावकारी थियो। यी परिणामहरूले यो बुझाइलाई समर्थन गर्दछ कि PBP2a निषेधले जीवाणुरोधी गतिविधिमा प्रमुख भूमिका खेल्छ, यसले परीक्षण गरिएका यौगिकहरू बीच अवलोकन गरिएको जैविक गतिविधिमा भिन्नताहरूलाई पूर्ण रूपमा व्याख्या गर्दैन। यी भिन्नताहरूले सुझाव दिन्छ कि संलग्न जीवाणुरोधी संयन्त्रहरूलाई पूर्ण रूपमा स्पष्ट पार्न थप प्रयोगात्मक विश्लेषणहरू र गहन जैविक मूल्याङ्कनहरू आवश्यक छन्।
तालिका ४ र पूरक डेटा फाइलमा रहेको आणविक डकिङ परिणामहरूले डकिङ स्कोर र एन्टिमाइक्रोबियल गतिविधि बीचको जटिल सम्बन्धलाई हाइलाइट गर्दछ। यद्यपि यौगिकहरू ६ र १३b मा यौगिकहरू ७, ९, १० र १४ भन्दा कम डकिङ स्कोरहरू छन्, तिनीहरूले उच्चतम एन्टिमाइक्रोबियल गतिविधि प्रदर्शन गर्छन्। तिनीहरूको अन्तरक्रिया नक्सा (चित्र ११ मा देखाइएको) ले संकेत गर्दछ कि तिनीहरूको कम बाइन्डिङ स्कोरहरूको बावजुद, तिनीहरूले अझै पनि PBP2a को प्रमुख अवशेषहरूसँग महत्त्वपूर्ण हाइड्रोजन बन्धन र π-स्ट्याकिङ अन्तरक्रियाहरू बनाउँछन् जसले जैविक रूपमा लाभदायक तरिकाले इन्जाइम-इनहिबिटर कम्प्लेक्सलाई स्थिर गर्न सक्छ। ६ र १३b को अपेक्षाकृत कम डकिङ स्कोरहरूको बावजुद, तिनीहरूको बढेको एन्टिमाइक्रोबियल गतिविधिले सुझाव दिन्छ कि अवरोधक क्षमताको मूल्याङ्कन गर्दा घुलनशीलता, स्थिरता, र सेलुलर अपटेक जस्ता अन्य गुणहरूलाई डकिङ डेटासँग संयोजनमा विचार गर्नुपर्छ। यसले नयाँ यौगिकहरूको चिकित्सीय क्षमताको सही मूल्याङ्कन गर्न प्रयोगात्मक एन्टिमाइक्रोबियल विश्लेषणसँग डकिङ अध्ययनहरू संयोजन गर्ने महत्त्वलाई हाइलाइट गर्दछ।
यी नतिजाहरूले प्रकाश पार्छन् कि आणविक डकिङ बाध्यकारी सम्बन्धको भविष्यवाणी गर्न र निषेधको सम्भावित संयन्त्रहरू पहिचान गर्न एक शक्तिशाली उपकरण हो, तर एन्टिमाइक्रोबियल प्रभावकारिता निर्धारण गर्न यसलाई मात्र भर पर्नु हुँदैन। आणविक डेटाले सुझाव दिन्छ कि PBP2a निषेध एन्टिमाइक्रोबियल गतिविधिलाई प्रभाव पार्ने एक प्रमुख कारक हो, तर जैविक गतिविधिमा परिवर्तनहरूले सुझाव दिन्छ कि उपचारात्मक प्रभावकारिता बढाउन अन्य भौतिक-रासायनिक र फार्माकोकाइनेटिक गुणहरूलाई अनुकूलित गर्नुपर्छ। भविष्यका अध्ययनहरूले जैव उपलब्धता र सेलुलर अपटेक सुधार गर्न यौगिकहरू 7 र 10 को रासायनिक संरचनालाई अनुकूलन गर्नमा ध्यान केन्द्रित गर्नुपर्छ, बलियो डकिङ अन्तरक्रियाहरू वास्तविक एन्टिमाइक्रोबियल गतिविधिमा अनुवाद गरिएको सुनिश्चित गर्दै। थप बायोएसे र संरचना-गतिविधि सम्बन्ध (SAR) विश्लेषण सहित थप अध्ययनहरू, यी यौगिकहरूले PBP2a अवरोधकहरूको रूपमा कसरी काम गर्छन् भन्ने बारे हाम्रो बुझाइलाई अगाडि बढाउन र थप प्रभावकारी एन्टिमाइक्रोबियल एजेन्टहरू विकास गर्न महत्त्वपूर्ण हुनेछ।
३-(एन्थ्रासेन-९-यल)-२-साइनोएक्रिलोयल क्लोराइड ४ बाट संश्लेषित यौगिकहरूले एन्टिमाइक्रोबियल गतिविधिको फरक-फरक डिग्री प्रदर्शन गरे, धेरै यौगिकहरूले मेथिसिलिन-प्रतिरोधी स्टेफिलोकोकस ऑरियस (MRSA) को महत्त्वपूर्ण अवरोध प्रदर्शन गरे। संरचना-गतिविधि सम्बन्ध (SAR) विश्लेषणले यी यौगिकहरूको एन्टिमाइक्रोबियल प्रभावकारिता अन्तर्निहित प्रमुख संरचनात्मक विशेषताहरू प्रकट गर्‍यो।
एन्टिमाइक्रोबियल गतिविधि बढाउनको लागि एक्रिलोनिट्राइल र एन्थ्रेसिन दुवै समूहको उपस्थिति महत्त्वपूर्ण साबित भयो। ब्याक्टेरियाको प्रोटीनसँगको अन्तरक्रियालाई सहज बनाउन एक्रिलोनिट्राइलमा अत्यधिक प्रतिक्रियाशील नाइट्राइल समूह आवश्यक छ, जसले गर्दा यौगिकको एन्टिमाइक्रोबियल गुणहरूमा योगदान पुर्‍याउँछ। एक्रिलोनिट्राइल र एन्थ्रेसिन दुवै भएका यौगिकहरूले निरन्तर रूपमा बलियो एन्टिमाइक्रोबियल प्रभावहरू प्रदर्शन गरे। एन्थ्रेसिन समूहको सुगन्धले यी यौगिकहरूलाई अझ स्थिर बनायो, सम्भावित रूपमा तिनीहरूको जैविक गतिविधि बढायो।
हेटेरोसाइक्लिक रिंगहरूको परिचयले धेरै डेरिभेटिभहरूको एन्टिब्याक्टेरियल प्रभावकारितामा उल्लेखनीय सुधार ल्यायो। विशेष गरी, बेन्जोथियाजोल डेरिभेटिभ १३बी र एक्रिलहाइड्राजाइड डेरिभेटिभ ६ ले लगभग ४ सेन्टिमिटरको अवरोध क्षेत्रको साथ उच्चतम एन्टिब्याक्टेरियल गतिविधि देखायो। यी हेटेरोसाइक्लिक डेरिभेटिभहरूले बढी महत्त्वपूर्ण जैविक प्रभावहरू देखाए, जसले हेटेरोसाइक्लिक संरचनाले एन्टिब्याक्टेरियल प्रभावहरूमा प्रमुख भूमिका खेल्छ भनेर संकेत गर्दछ। त्यस्तै गरी, यौगिक ९ मा पाइरिमिडिनेथियोन, यौगिक १० मा थियोपाइराजोल, र यौगिक ११ मा टेट्राजिन रिंगले यौगिकहरूको एन्टिब्याक्टेरियल गुणहरूमा योगदान पुर्‍यायो, जसले हेटेरोसाइक्लिक परिमार्जनको महत्त्वलाई अझ प्रकाश पार्यो।
संश्लेषित यौगिकहरू मध्ये, 6 र 13b तिनीहरूको उत्कृष्ट जीवाणुरोधी गतिविधिहरूको लागि अलग थिए। यौगिक 6 को न्यूनतम निरोधात्मक सांद्रता (MIC) 9.7 μg/100 μL थियो, र न्यूनतम जीवाणुनाशक सांद्रता (MBC) 78.125 μg/100 μL थियो, जसले मेथिसिलिन-प्रतिरोधी स्टेफिलोकोकस ऑरियस (MRSA) सफा गर्ने यसको उत्कृष्ट क्षमतालाई प्रकाश पार्छ। त्यस्तै गरी, यौगिक 13b मा 4 सेमी को निरोध क्षेत्र र कम MIC र MBC मानहरू थिए, जसले यसको शक्तिशाली जीवाणुरोधी गतिविधि पुष्टि गर्दछ। यी परिणामहरूले यी यौगिकहरूको जैव प्रभावकारिता निर्धारण गर्न एक्रिलोहाइड्राजाइड र बेन्जोथियाजोल कार्यात्मक समूहहरूको प्रमुख भूमिकाहरूलाई हाइलाइट गर्दछ।
यसको विपरित, यौगिकहरू ७, १० र १४ ले ३.६५ देखि ३.९ सेन्टिमिटरसम्मको अवरोध क्षेत्रहरू सहित मध्यम जीवाणुरोधी गतिविधि प्रदर्शन गरे। यी यौगिकहरूलाई ब्याक्टेरियालाई पूर्ण रूपमा मार्न उच्च सांद्रता आवश्यक पर्दछ, जुन तिनीहरूको तुलनात्मक रूपमा उच्च MIC र MBC मानहरू द्वारा प्रतिबिम्बित हुन्छ। यद्यपि यी यौगिकहरू यौगिकहरू ६ र १३b भन्दा कम सक्रिय थिए, तिनीहरूले अझै पनि महत्त्वपूर्ण जीवाणुरोधी क्षमता देखाए, जसले सुझाव दिन्छ कि हेटेरोसाइक्लिक रिंगमा एक्रिलोनिट्राइल र एन्थ्रेसीन मोइटीहरूको समावेशले तिनीहरूको जीवाणुरोधी प्रभावमा योगदान पुर्‍याउँछ।
यौगिकहरूको कार्य गर्ने तरिका फरक-फरक हुन्छ, केहीले जीवाणुनाशक गुणहरू प्रदर्शन गर्छन् भने अरूले ब्याक्टेरियोस्टेटिक प्रभावहरू प्रदर्शन गर्छन्। यौगिकहरू ७, ११, १३a, र १५ जीवाणुनाशक हुन् र ब्याक्टेरियालाई पूर्ण रूपमा मार्न कम सांद्रता चाहिन्छ। यसको विपरित, यौगिकहरू ६, १३b, र १४ ब्याक्टेरियोस्टेटिक हुन् र कम सांद्रतामा ब्याक्टेरियाको वृद्धिलाई रोक्न सक्छन्, तर ब्याक्टेरियालाई पूर्ण रूपमा मार्न उच्च सांद्रता चाहिन्छ।
समग्रमा, संरचना-गतिविधि सम्बन्ध विश्लेषणले महत्त्वपूर्ण जीवाणुरोधी गतिविधि प्राप्त गर्न एक्रिलोनिट्राइल र एन्थ्रेसिन मोइटीज र हेटेरोसाइक्लिक संरचनाहरू परिचय गराउनुको महत्त्वलाई प्रकाश पार्छ। यी नतिजाहरूले सुझाव दिन्छ कि यी संरचनात्मक घटकहरूको अनुकूलन र घुलनशीलता र झिल्ली पारगम्यता सुधार गर्न थप परिमार्जनहरूको अन्वेषणले अझ प्रभावकारी एन्टी-MRSA औषधिहरूको विकास निम्त्याउन सक्छ।
सबै अभिकर्मक र विलायकहरू मानक प्रक्रियाहरू प्रयोग गरेर शुद्ध र सुकाइएका थिए (एल गोमहोरिया, इजिप्ट)। पग्लने बिन्दुहरू ग्यालेनक्याम्प इलेक्ट्रोनिक पग्लने बिन्दु उपकरण प्रयोग गरेर निर्धारण गरिएको थियो र सुधार बिना रिपोर्ट गरिएको छ। इन्फ्रारेड (IR) स्पेक्ट्रा (cm⁻1) थर्मो इलेक्ट्रोन निकोलेट iS10 FTIR स्पेक्ट्रोमिटर (थर्मो फिशर साइन्टिफिक, वाल्थम, एमए, संयुक्त राज्य अमेरिका) मा पोटासियम ब्रोमाइड (KBr) पेलेटहरू प्रयोग गरेर ऐन शम्स विश्वविद्यालयको विज्ञान संकायको रसायन विज्ञान विभागमा रेकर्ड गरिएको थियो।
GEMINI NMR स्पेक्ट्रोमिटर (GEMINI Manufacturing & Engineering, Anaheim, CA, USA) र BRUKER 300 MHz NMR स्पेक्ट्रोमिटर (BRUKER Manufacturing & Engineering, Inc.) प्रयोग गरेर 300 MHz मा 1H NMR स्पेक्ट्रा प्राप्त गरिएको थियो। Tetramethylsilane (TMS) लाई डियुरेटेड डाइमिथाइल सल्फोक्साइड (DMSO-d₆) को साथ आन्तरिक मानकको रूपमा प्रयोग गरिएको थियो। NMR मापनहरू विज्ञान संकाय, कायरो विश्वविद्यालय, गिजा, इजिप्टमा गरिएको थियो। एलिमेन्टल विश्लेषण (CHN) पर्किन-एल्मर 2400 एलिमेन्टल विश्लेषक प्रयोग गरेर गरिएको थियो र प्राप्त परिणामहरू गणना गरिएका मानहरूसँग राम्रोसँग सहमत छन्।
एसिड ३ (५ एमएमओएल) र थायोनिल क्लोराइड (५ एमएल) को मिश्रणलाई ६५ डिग्री सेल्सियसमा पानीको नुहाउने ठाउँमा ४ घण्टाको लागि तताइएको थियो। कम दबाबमा आसवनद्वारा अतिरिक्त थायोनिल क्लोराइड हटाइएको थियो। परिणामस्वरूप रातो ठोस सङ्कलन गरियो र थप शुद्धीकरण बिना प्रयोग गरियो। पग्लने बिन्दु: २००-२०२ डिग्री सेल्सियस, उत्पादन: ८८.५%। IR (KBr, ν, cm−१): २२२४ (C≡N), १७३७ (C=O)। १H-NMR (४०० MHz, DMSO-d6) δ (ppm): ९.२६ (s, १H, CH=), ७.२७-८.५७ (m, ९H, हेटेरोएरोमेटाइजेशन)। १३C NMR (७५ MHz, DMSO-d6) δ (ppm): ११५.११ (C≡N), १२४.८२–१३०.५३ (CH एन्थ्रेसीन), १५५.३४, ११४.९३ (CH=C–C=O), १६२.२२ (C=O); HRMS (ESI) m/z [M + H]+: २९१.७३१११। विश्लेषक। C18H10ClNO (२९१.७३) को लागि गणना गरिएको: C, ७४.११; H, ३.४६; N, ४.८०। फेला पर्यो: C, ७४.४१; H, ३.३४; N, ४.६६%।
०°C मा, ४ (२ mmol, ०.७ ग्राम) लाई निर्जल डाइअक्सेन (२० मिली) मा घोलियो र हाइड्राजिन हाइड्रेट (२ mmol, ०.१६ मिली, ८०%) लाई थोपा थोपा थपियो र १ घण्टाको लागि हलचल गरियो। अवक्षेपित ठोसलाई निस्पंदनद्वारा सङ्कलन गरियो र यौगिक ६ दिन इथेनॉलबाट पुन: क्रिस्टलाइज गरियो।
हरियो क्रिस्टल, पग्लने बिन्दु १९०-१९२℃, उत्पादन ६९.३६%; IR (KBr) ν=३४२४ (NH), २२२८ (C≡N), १७२० (C=O), १६२१ (C=N) cm−१। १H-NMR (४०० MHz, DMSO-d६) δ (ppm): ९.३ (br s, H, NH, विनिमेय), ७.६९-८.५१ (m, १८H, हेटेरोएरोमेटिक), ९.१६ (s, १H, CH=), ८.५४ (s, १H, CH=); C३३H२१N३O (४७५.५३) को लागि गणना गरिएको मान: C, ८३.३५; H, ४.४५; N, ८.८४। फेला पर्यो: C, ८४.०१; H, ४.३८; N, ८.०५%।
२० मिलिलिटर निर्जल डाइअक्सेन घोल (ट्राइइथिलामाइनका केही थोपाहरू भएको) मा ४ (२ एमएमओएल, ०.७ ग्राम) घोल्नुहोस्, फेनिलहाइड्राजिन/२-एमिनोपायरिडिन (२ एमएमओएल) थप्नुहोस् र कोठाको तापक्रममा क्रमशः १ र २ घण्टाको लागि हलचल गर्नुहोस्। प्रतिक्रिया मिश्रणलाई बरफ वा पानीमा खन्याउनुहोस् र पातलो हाइड्रोक्लोरिक एसिडले अम्लीकरण गर्नुहोस्। छुट्याइएको ठोसलाई छान्नुहोस् र ७ प्राप्त गर्न इथेनॉलबाट पुन: क्रिस्टलाइज गर्नुहोस् र ८ प्राप्त गर्न बेन्जिनबाट पुन: क्रिस्टलाइज गर्नुहोस्।
हरियो क्रिस्टल, पग्लने बिन्दु १६०-१६२℃, उत्पादन ७७%; IR (KBr, ν, cm−१): ३२४५ (NH), २२२२ (C≡N), १६९१ (C=O), १६७१ (C=O) cm−१। १H-NMR (४०० MHz, DMSO-d६): δ (ppm): १०.८८ (s, १H, NH, विनिमेय), ९.१५ (s, १H, CH=), ८.८१ (s, १H, CH=), ६.७८-८.५८ (m, २३H, हेटेरोएरोमेटिक); C४२H२६N४O२ (६१८.६८) को लागि गणना गरिएको मान: C, ८१.५४; H, ४.२४; N, ९.०६। फेला पर्यो: C, ८१.९६; H, ३.९१; N, ८.९१%।
४ (२ एमएमओएल, ०.७ ग्राम) लाई २० मिलिलिटर निर्जल डाइअक्सेन घोलमा (केही थोपा ट्राइइथिलामाइन भएको) घोलिएको थियो, २-एमिनोपाइरिडिन (२ एमएमओएल, ०.२५ ग्राम) थपिएको थियो र मिश्रणलाई कोठाको तापक्रममा २ घण्टाको लागि हलचल गरिएको थियो। प्रतिक्रिया मिश्रणलाई बरफको पानीमा खन्याइएको थियो र पातलो हाइड्रोक्लोरिक एसिडले एसिडिफाइ गरिएको थियो। बनेको अवक्षेपणलाई फिल्टर गरिएको थियो र बेन्जिनबाट पुन: क्रिस्टलाइज गरिएको थियो, जसले १४६-१४८ डिग्री सेल्सियसको पग्लने बिन्दु र ८२.५% उपजको साथ ८ को हरियो क्रिस्टलहरू प्रदान गर्‍यो; इन्फ्रारेड स्पेक्ट्रम (KBr) ν: ३१४८ (NH), २२२२ (C≡N), १६६५ (C=O) सेमी−१। १H NMR (४०० MHz, DMSO-d६): δ (ppm): ८.७८ (s, H, NH, विनिमययोग्य), ९.१४ (s, १H, CH=), ७.३६-८.५५ (m, १३H, हेटेरोएरोमेटाइजेसन); C२३H१५N३O (३४८.३८) को लागि गणना गरिएको: C, ७९.०७; H, ४.३३; N, १२.०३। फेला पर्यो: C, ७८.९३; H, ३.९७; N, १२.३६%।
यौगिक ४ (२ एमएमओएल, ०.७ ग्राम) लाई २० मिलिलिटर सुख्खा डाइअक्सेन (केही थोपा ट्राइइथिलामाइन र २ एमएमओएल थायोरिया/सेमिकर्बजाइड भएको) मा घोलियो र २ घण्टाको लागि रिफ्लक्समा तताइयो। विलायकलाई भ्याकुओमा वाष्पीकरण गरियो। मिश्रण दिनको लागि अवशेषलाई डाइअक्सेनबाट पुन: क्रिस्टलाइज गरियो।